【摘要】 目的 探討脂多糖(LPS) 刺激下NUFIP-1 介導核糖體自噬在樹突細胞(DCs) 凋亡中
的作用及意義。方法 將培養的樹突細胞系DC2.4 分為空白對照組及LPS 刺激6、12、24、48、
72 h 組(n=5)，LPS 各亞組加入1 μg/mL LPS 培養相應時間。采用Western blot 檢測各組細胞
NUFIP-1 及自噬相關蛋白p62 和LC3B 表達水平，激光共聚焦顯微鏡檢測NUFIP-1 在細胞中的表
達與定位及其分別與Lyso-tracker、LC3B 共定位情況。將載有沉默空載體NS 及沉默慢病毒載體
NUFIP-1 siRNA 感染DC2.4 (n=3)，以1 μg/mL LPS 刺激24 h，應用流式細胞分析術檢測細胞凋
亡情況，并采用Western blot 檢測凋亡相關蛋白包括胱天蛋白酶(cleaved-caspase-3) 和Bcl-2 表達水
平。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用LSD-t 法進一步進行組間兩兩比較。
以P<0.05 為差異有統計學意義。結果 Western blot 結果提示， LPS 刺激不同時間(6、12、24、
48、72 h) 后DC2.4 中NUFIP-1 蛋白表達水平呈現先升高后下降趨勢，其中LPS 24 h 組NUFIP-1
表達水平顯著高于空白對照組[ 空白對照組：(0.6786 ± 0.0820) ；LPS 24 h 組：(1.4830 ± 0.1170)，
P<0.01]。同時，LPS 24 h 組p62 表達水平顯著低于空白對照組[ 空白對照組：(0.9087 ± 0.1235) ；
LPS 24 h 組：(0.3113 ± 0.5571)，P<0.01]。LPS 24 h 組LC3B-I 向LC3B- Ⅱ的轉化顯著高于空白對
照組[ 空白對照組：(0.5542 ± 0.1248) ；LPS 24 h 組：(2.5310 ± 0.3119)，P<0.01]。激光共聚焦顯
微鏡觀察顯示，NUFIP-1 主要定位于細胞核及核周，LPS 刺激后其熒光強度于6 h 至24 h 呈時間
依賴性增強，而刺激48、72 h 明顯減弱。同時，NUFIP-1 與Lyso-tracker 及LC3B 的共定位較空白
對照組顯著增強。采用慢病毒感染技術感染NUFIP-1 siRNA 可顯著下調DC2.4 NUFIP-1 表達水平，
與空白對照組及空載體組比較分析，差異有統計學意義[ 空白對照組：(0.6627 ± 0.1707) ；空載體
組：(0.6966 ± 0.1107) ；siRNA 組：(0.1428 ± 0.0296)，P<0.05]。流式細胞分析術顯示，NUFIP-1
siRNA 感染組在LPS 刺激后較空白對照LPS 24 h 組及空載體LPS 24 h 組DC2.4 凋亡率顯著升高[ 空
白對照LPS 24 h 組：(47.91%±1.006%) ；空載體LPS 24 h 組：(70.26% ± 1.011%) ；siRNA LPS 24
h 組：(80.23% ± 2.094%)，P<0.01]。Western blot 分析進一步證實，NUFIP-1 siRNA 感染組相較空
白對照組及空載體組在LPS 刺激下DC2.4 凋亡相關蛋白cleaved-caspase-3 表達顯著增強[ 空白對
照LPS 24 h 組：(0.4748 ± 0.0876)；空載體LPS 24 h 組：(0.2849 ± 0.0418)；siRNA LPS 24 h 組：(0.9733
± 0.0525)，P<0.01]，抗凋亡蛋白Bcl-2 表達則明顯下調[ 空白對照LPS 24 h 組：(0.7810 ± 0.0490)；
空載體LPS 24 h 組：(0.8292 ± 0.0729) ；siRNA LPS 24 h 組：(0.3957 ± 0.0838)，P<0.05]。 結
論 LPS 刺激后DC2.4 中NUFIP-1 介導核糖體自噬明顯活化，且對DC2.4 凋亡具有顯著保護效應。

鄭麗玉,姚人騏,董寧,吳瑤,姚詠明. 核糖體自噬對脂多糖誘導樹突細胞凋亡的影響[J]. 中華急診醫學雜志, 2022,31(10): 1334-1340.
DOI號:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2022.10.006